水中葉綠素a的測定步驟

水中葉綠素濃度是浮游生物分布的指標，是衡量水體初級生產(chǎn)力和富營養(yǎng)化作用的最基本的指標。葉綠素分為葉綠素a和b，當前研究更關注葉綠素a的濃度。浮游植物的大量生長是水體富營養(yǎng)化的主要現(xiàn)象，其中葉綠素a是所有浮游植物門類都含有的葉綠素類型，不僅作為水體營養(yǎng)狀態(tài)劃分的重要指標，而且可用于表征浮游植物的現(xiàn)存量。因此，葉綠素a在水體富營養(yǎng)狀況評價中起關鍵性作用。

葉綠素a本身對環(huán)境沒有危害，但它是估算浮游植物生物量的重要指標，可以通過測定水中浮游植物葉綠素a的含量，掌握水體的初級生產(chǎn)力情況和富營養(yǎng)化水平，在環(huán)境監(jiān)測中，葉綠素a含量是評價水體富營養(yǎng)化的指標之一。國際上，經(jīng)濟合作與發(fā)展組織（OECD）規(guī)定了關于評定湖泊營養(yǎng)狀態(tài)的葉綠素a劃分標準。我國原地表水環(huán)境質量標準（GHZB1-1999）中規(guī)定了葉綠素a標準值，但是現(xiàn)行有效的地表水環(huán)境質量標準（GB3838-2002）沒有葉綠素a的標準值。

水中葉綠素a的測定步驟具體是什么呢？

（1）提取試劑

除熱乙醇法，國內(nèi)外標準方法均采用90%丙酮作為提取試劑。EPA446.0指出，90%丙酮溶液可以有效提取大部分藻類細胞中的葉綠素a，而且不產(chǎn)生其他衍生物。丙酮是國際上較為公認的提取葉綠素的試劑

（2）濾膜

除《水和廢水檢測分析方法（第四版）》采用乙酸纖維濾膜外，均采用玻璃纖維濾膜。

（3）樣品保存方法

樣品的保存條件各種方法略有不同，但水樣采集后均保證4℃冷藏保存，樣品濾膜可冷凍保存。而且葉綠素a測定樣品濾膜冷凍后再研磨，可提高提取效率。在《浮游植物中葉綠素a提取方法的比較與改進》的研究結果。如采樣后不立刻測定，-18℃下冰凍，再于室溫條件下融解，利用細胞內(nèi)冰粒的形成和細胞液濃度的增高引起溶漲，使胞壁結構破碎引起葉綠素溶出。

（4）是否研磨及研磨后是否需要浸泡

雖然研磨的方法較為費力，但是該方法操作簡單，儀器設備要求低，常溫操作不會對葉綠素a造成破壞，細胞破碎完全，對葉綠素的提取速度快，效率高，并在環(huán)境監(jiān)測系統(tǒng)廣泛應用，考慮到方法的經(jīng)典性和數(shù)據(jù)的可沿用性，新的技術線路中關于對葉綠素a的提取步驟沿用《水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）》中的研磨方法，研磨提取葉綠素a，主要通過機械作用破壞藻類的細胞壁和葉綠體使葉綠素a溶解于丙酮，并在此基礎上進行改進。

（5）計算公式及波長

關于計算方法，主要有三色法和單色法，三色法主要考慮了葉綠素b和葉綠素c對測定的干擾，測定的是表觀葉綠素a的含量（包括葉綠素a與脫鎂葉綠素a之和），單色法考慮脫鎂葉綠素a的干擾。從方法的簡便性來說，三色法操作簡單，產(chǎn)生誤差幾率小，耗時比單色法短；目前《水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）》中測定葉綠素a的方法在地表水環(huán)境監(jiān)測中應用最為廣泛，該方法采用丙酮研磨提取葉綠素a，用三色法計算葉綠素a的濃度。